加同上清液等体积氯仿-异戊醇，室温 下剧烈振荡2.5min，然后10 000r/min 离心5min。吸出上层清液，转入另一新 Eppendorf 管。

　　细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起， 以核蛋白的形式存在。因此，提取RNA时要 把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含 有十二烷基磺酸钠（SDS）的缓冲液中，加 等体积水饱和酚，通过剧烈振荡，然后离 心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于水 相，被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相， 或者在两相界面处形成凝胶层。

　　4．沉淀RNA 加2 倍体积95％乙醇（含2％乙酸钾）， 在冰浴中放置30min，使RNA 沉淀。再 以10 000r/min 离心5min，弃上清液，

　　苯酚法提取。因此，提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。核酸溶于水相， 被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相，或者在两相界面处形成凝胶层。本实验采用的 0.15mol/L 缓冲液系统可使大部分RNA-蛋白复合物解离，而DNA-蛋白复合物只有极 少部分解离。（2）饱和酚液：重蒸苯酚用SDS溶液饱和。（4）含2％乙酸钾的95％ 乙醇溶液。注意事项：。4、由于我们用的是260nm不可见光,要用石英比色皿

　　式中，A260为260nm处的吸光度；L为比色杯 光径（cm）；0.024为lml溶液含lμgRNA的吸 光度

　　2、使用离心机时,对称的两只Eppendorf管 的质量一定要相同，以保证重心在轴心 上。

　　解离；用酚处理时DNA-蛋白复合物变性，在低温条件 下从水相中除去，这样得到的RNA 制品中混杂的 DNA 极少。用氯仿-异戊醇继续处理RNA 制品，可进 一步除去其中少量的蛋白质。最后用乙醇使RNA 从 水溶液中沉淀出来。本法得到的RNA 不仅纯度高，而且

　　3、有些Eppendorf管，密封不紧，一定要 注意防漏。还有的Eppendorf管底部有裂 纹，在离心时要把要把有裂纹的一侧放 在内侧，防止Eppendorf管炸裂。

　　1．粗提取RNA 称量干燥的Eppendorf管的质量,取活性干酵 母在研钵中研碎，取1g加入Eppendorf管,加 10mL SDS-缓冲液使成匀浆。再加溶菌酶1mL ，混匀，室温静置10min，再加10ml饱和酚液 ，室温下剧烈振荡5min，置冰浴中分层。

　　50μg／ml的溶液，在紫外可见分光光度计上测 定其260nm处的吸光度，按下式计算RNA制 品纯度及RNA 提取率