现在实验室大多用的是提取试剂盒，如果自制溶液碱性过强会有可能出现拖尾现象，蛋白沉降步骤不完全也会有可能导致基因组DNA降解出现拖尾现象。类似于溶液方面的问题一般比较容易排除，而且比较容易改正。电泳结果拖尾大部分原因与实验操作有关，在加入碱性溶液裂解细胞后操作需要轻柔，静置时间不宜过长，剧烈震荡以及静置时间过长均可导致质粒DNA断裂，电泳结果中出现拖尾现象。......

　　实验概要本实验介绍了将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆，即转化子。实验原理受体菌Ecoli RRI  在低温条件下经Ca   处理，可改变细胞膜的通透性，利于受体菌对DNA的摄取，这种经Ca   处理的细菌称感受态菌。pBR322  质粒带有氨基苄青霉素（Ap）和四

　　现在用质粒提取试剂盒非常方便，而且菌体培养后，可以多管浓缩提取，提到的质粒量多，可以-20℃保存，以后用于酶切、转化等实验，可以提前跑个胶，只要不降解，就可以继续用，避免每次要用，都要培养一遍再提取一遍。 提取质粒的时候，后一步的酒精挥发很关键，基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。所以这

　　1．用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。2．将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA混合，振荡均匀。（若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini－prep DNA”方法制得，则不需加载体DNA）。3．加0.5ml PLATE溶液，振荡。PL

　　实验方法原理将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；再将文库质粒转化到酵母中实验材料单菌落试剂、试剂盒PLATE溶液载体DNA转化质粒DNA仪器、耗材离心管离心机实验步骤1、 用牙签从平板中挑取单菌

　　实验概要本实验介绍了96孔板质粒提取流程。主要试剂异丙醇，乙醇主要设备96孔板，高速离心机，水浴锅，通风橱实验材料重组大肠杆菌实验步骤1. 取lml培养基注板，挑单克隆于96孔板内摇培16-24h；2. 1500g，离心5min；或4000g，离心3min；3. 加入200ul溶液I，加牙签盖盖震荡

　　载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素  复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。  抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+  多克隆

　　质粒是先用分光光度计定浓度的,然后根据你转染的方法,转染细胞的多少确定要转多少质粒,然后就可以算加入的体积了.

　　需要点样看一下如果很粘稠但是量很少，则是蛋白质污染如果很浓，则是好的质粒。

　　碱裂解法 平衡离心法             实验方法原理 这一方案科能是最常用的质粒制备方法，该法不仅相当决捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。

　　实验方法原理转化活性是检测质粒生物活性的重要指标，在基因克隆技术中，转化（transformation）是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA（包括人工染色体）导入细胞的过程， 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态，用于转化的受体细胞一般

　　质粒是小型环状DNA分子,大小为1～200kb(1kb=1000碱基对)。质粒不同于病毒,是裸露的DNA分子,没有外壳蛋白,在基因组中,也没有溶菌酶基因。质粒在宿主细胞内才能完成自身复制,同时将编码的一些非染色体控制的遗传性状进行表达,赋予宿主细胞一些额外的特性,包括抗性特性、代谢特性等,其中对

　　基本特性：①质粒DNA的复制为不依赖细菌染色体而自主复制；②可自行丢失和消除；③转移性；④编码产物赋予细菌某些性状特征。

　　中文名称：嵌合质粒英文名称：chimeric plasmid定义：一种在体外通过连接不同的质粒片段而构建成的杂合质粒分子。在转化进入宿主细胞后，会形成具有新的生物学功能的复制子。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）

　　中文名称质粒维持序列英文名称plasmid maintenance sequence定义存在于重组质粒中的、与保持其在宿主中稳定复制有关的序列。如乳酸菌质粒pGT232的一段由双链复制起点和编码复制起始蛋白repA的基因所组成的1.7 kb的序列。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与

　　松弛控制（relaxed control）型质粒，其复制宿主不偶联，每个细胞中有几十到几百个拷贝。每个质粒DNA上都有复制的起点，只有ori能被宿主细胞复制蛋白质识别的质粒才能在该种细胞中复制，不同质粒复制控制状况主要与复制起点的序列结构相关。

　　中文名称质粒获救英文名称plasmid rescue定义一种通过构建同源辅助质粒，使携带外源DNA的外来质粒能与之重组而被摄入细菌的技术。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）

　　酵母质粒载体既可以在大肠杆菌复制与扩增、又可以在酵母系统中复制与扩增,故此类载体又称为穿梭载体(shuttlevector)。在基因工程中,应用上述病毒表达载体在哺乳动物细胞中进行中、小规模的表达是十分实际的。还要有对组织培养技术十分熟悉的前提。但病毒载体的运用仍然存在技术较难、耗时间和不经

　　连接反应（一）外源ＤＮＡ和质粒载体的连接反应外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５磷酸和相邻的3羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况

　　实验方法原理 这一方案科能是最常用的质粒制备方法，该法不仅相当决捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS异丙醇乙醇乙酸甲仪器、耗材 离心机漩涡混合器水浴锅实验步骤 1.  往2 ml 烧瓶中加入500 ml ，含有适当抗生素的L

　　耐药质粒 DNA转化实验本实验学习将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆，即转化子。 【原理】受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca++ 处理，可改变细胞膜的通透性，利于受体菌对DNA的摄取，这种经Ca++ 处理的细菌称感受态菌。pBR322 质粒

　　酵母质粒载体既可以在大肠杆菌复制与扩增、又可以在酵母系统中复制与扩增，故此类载体又称为穿梭载体(shuttlevector)。在基因工程中，应用上述病毒表达载体在哺乳动物细胞中进行中、小规模的表达是十分实际的。还要有对组织培养技术十分熟悉的前提。但病毒载体的运用仍然存在技术较难、耗时间和不经济的问题

　　质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体。许多细菌除了染色体外，还有大量很小的环状DNA分子，这就是质粒(plasmid)

　　实验室里经常听到这样的抱怨：实验没做好，实验没结果，心情郁闷。但其实静下心来查找原因，往往是由于操作上面的不认真，或是一些小小的细节没有注意到，以下是10个实验室日常小技巧。 主题： 关于质粒提取的小技巧 内容： 现在用质粒提取试剂盒非常方便，

　　实验方法原理 转化活性是检测质粒生物活性的重要指标，在基因克隆技术中，转化（transformation）是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA（包括人工染色体）导入细胞的过程， 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态，用于转化的受