添加盐类就可从已和主体水相分开的有机相中分 离出含有目的物的浓水溶液，操作简单。

　　（1）水壳模型 ，蛋白 质位于水池的中心，周 围存在的水层将其与反 胶团壁（表面活性剂） 隔开； （2）蛋白质中的亲脂 部分直接与非极性溶 剂的碳氢化合物相接 触；

　　（4）蛋白质被几 个微胶团所溶解， 微胶团的非极性尾 端与蛋白质的亲脂 部分直接作用。 大多数学者接受的 是水壳模型。

　　蛋白质的萃取与蛋白质的表面电荷、反胶 团内表面电荷之间静电作用及反胶束的大 小有关。

　　如利用反胶团分离核糖核酸酶、细胞色素C和溶菌 酶三种蛋白。如下图。此工艺过程称为多步混合/ 澄清萃取。

　　用TOMAC/异辛烷反胶团溶液对α -淀粉酶水溶解进行 两级（混合-澄清槽）连续萃取和反萃取操作。

　　结果： α-淀粉酶浓缩8倍，酶活力约为45%， 如果在反胶团相中添加非离子型表面活性 剂以提高分配系数，并增大搅拌转速提高 其传质速率，则反萃取水相中的α-淀粉酶 活力得率达到85%，浓缩17倍，且反胶团 每次循环的表面活性剂损失可减少到2.5%。

　　一、概述 二、反胶团的形成 三、生理活性物质的分离浓缩 四、反胶团萃取的应用 五、思考题

　　反胶团（Reversed Micelles）:是两性表面活 性剂在有机溶剂中亲水性基团自发地向内聚集 而成的，内含微小水滴的，空间尺寸仅为纳米 级的集合型胶体。 反胶团的微小界面和微小水相具有两个特异性 的功能： （1）具有分子识别并允许选择性透过的半透 膜的功能； （2）在疏水性环境中具有使亲水性大分子如 蛋白质等保持活性的功能。

　　以超临界流 体为萃取剂， 以液体为萃取剂， 含有目标产 含目标 含有目标产物原 液液萃取 产物的 液固萃取 超临界 物的原料可 料为液体 或浸取 流体萃取 以是液体， 原料为 固体 也可以是固 根据萃取剂的种类和形式的不同分为： 体。

　　利用含有反胶团的有机相作为液膜，从一水相 向另一水相中选择性地输送生理活性物质的液 膜分离方法，见下图， 正萃取和反萃取能同时在一个装置内进行，表 面活性剂的用量和损失少。

　　萃取平衡后，胰凝乳蛋白酶基本保留在W1相， 而80%以上的溶菌酶被反萃取到W2相中。

　　表面活性剂？是由亲水憎油的极性基团和亲油憎水的 非极性基团两部分组成的两性分子。 三类：阴离子型、阳离子型和非离子型表面活性剂。 最常用的是阴离子表面活性剂：

　　具有双链结构，极性基团较小，所形成的反 胶团空间较大，半径可达170nm，有利于生 物分子的进入，形成胶束时不需加助剂,且有 较好的强度。 反胶团萃取系统的非极性有机溶剂有： 环己烷，辛烷、庚烷、异辛烷、己烷等。

　　离子强度增大后，反胶团内表面的双电层变薄， 减弱了蛋白质与反胶团内表面之间的静电吸引， 从而减少蛋白质的溶解度； 反胶团内表面的双电层变薄后，也减弱了表面 活性剂极性基团之间的斥力，使反胶团变小， 从而使蛋白质不能进入其中； 离子强度增加时，增大了离子向反胶团“水池” 的迁移并有取代其中蛋白质的倾向(盐析)。 盐与蛋白或表面活性剂的相互作用，可以改变 溶解性能，盐的浓度越高，其影响就越大。

　　是蛋白质从主体水相向溶解于有机溶剂相中纳 米级的、均一且稳定的、分散的反胶团微水相中的 分配萃取。

　　萃取进入有机相的生物大分子被表面活性分子所 屏蔽，从而避免了与有机溶剂相直接接触而引起的 变性、失活。 可通过调整pH、离子强度、表面活性剂浓度等来 控制分离场（反胶团）--待分离物质（生物大分子） 的相互作用，实现对目的物质高选择性的萃取。

　　（1）注入法 将含蛋白质的水溶液直接注入含有 表面活性剂的非极性有机溶剂中去，然后进行 搅拌直到形成透明的溶液为止。 （2）相转移法 将酶或蛋白质从主体水相转移到 含表面活性剂的非极性有机溶剂中形成反胶团蛋白质溶液。可得较高蛋白质浓度。 （3）溶解法 对非水溶性蛋白质可用该法。将含 有反胶团（W=3-30）的有机溶液与蛋白质固体 粉末一起搅拌，使蛋白质进入反胶团中，所需 时间长。

　　（1）反胶团的临界胶团浓度 将表面活性剂在非极性有机溶剂相中能形成反 胶团的最小浓度称为临界胶团浓度（Critical Micelle Concentration,CMC），一般为0.11.0mmol/L，与表面活性剂的种类有关。 （2）反胶团的形成与大小 比水相中微胶团的空间尺寸小得多，多为球形， 也可能为椭球形或棒形。大小与溶剂和表面活性 剂的种类、浓度、温度、离子强度有关。

　　中空纤维膜材料为聚丙烯，孔径0.2um， 保证酶和含有酶的反胶团能够自由通过。 优点： 水相和有机相分别通过膜组件的内外两侧， 保证两相有很高的接触比表面积； 膜起固定两相界面的作用，从而在连续操 作的条件下可防止混液等现象的发生，流 速可自动调整。

　　（1）水相的pH值决定了蛋白质表面电荷的 状态，从而对萃取过程造成影响。

　　（2）只有当反胶团的内表面电荷与蛋白质表 面电荷相反时，两者产生静电引力，蛋白质才 能进入反胶束。 （3）对于阴离子表面活性剂，当pHpI (蛋 白质等电点)时，萃取率几乎为0；当pHpI时， 萃取率急剧提高；如pH值很低，在界面上会产 生白色絮凝物，并且萃取率也降低，这可能是 蛋白质变性的缘故。

　　W越大，反胶团ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ半径越大。W=C水/C表 注意：反胶团“水池”中的水与普通的水在性质 上是有差异的。当含水率W0较低时，反胶团水池 内的理化性质与正常水相差悬殊。

　　例如，用AOT为表面活性剂时，当W06-8时，反胶团内 微水相的水分子受表面活性剂亲水基团的强烈束缚，表观 粘度上升50倍，水合化一分子AOT需6-8个水分子，其它 水分子不受束缚； 当W016时，微水相的水与正常的水接近，反胶团内形成 双电层。

　　（4）对不同相对分子量的蛋白质，pH值 对萃取率的影响有差异：  当Pr相对分子量增加时，只有增大pH值 的绝对值，相转移才能顺利完成。 例如，α 糜蛋白酶（25000）的萃取率在 pH低于pI2-4时达到最高，而牛血清蛋白 （68000）在相同的系统中根本不发生相 转移。

　　盐浓度增大 同时还有空 间排阻作用。 会使反胶团 相产生脱水 效应，使反 胶团直径减 小，空间的 排阻作用增 大，蛋白质 的溶解率下 降。

　　反胶团萃取在等电点处进行时，排除了静电相 互作用，随蛋白质的相对分子质量增大，空间排阻 作用增大，蛋白质的溶解率降低。 我们可根据蛋白质间分子量的差别选择性地进 行蛋白质的反胶团萃取分离。

　　胶团（表面活性剂的聚集体）； 非极性溶剂中表面活性剂（浓度某一数值）表 面活性剂的聚集体（反胶团）。

　　极性核心（表面活性剂极性端组成的内表面、平衡 离子和水，被称为水池（water pool））。 水池可溶解具有极性的分子和亲水性的生物大分 子，故极性分子和亲水性的生物大分子可“溶解” 在非极性的有机溶剂中。

　　（1）有很高的萃取率和反萃取率并具有选择性； （2）分离、浓缩可同时进行，过程简便； （3）能解决蛋白质（如胞内酶）在非细胞环境中 迅速失活的问题；

　　（4）由于构成反胶团的表面活性剂往往具有细胞 壁功效，因而可直接从完整细胞中提取具有活 性的蛋白质和酶；