本发明涉及分离白酒中挥发性酯类风味物质的固相萃取柱串联方法，属于白酒风味分析技术领域。

　　白酒中成分复杂，种类繁多，特别是酯类物质种类多达几百种，但香气类似，大多呈现水果香、花香等香气，在采用气相色谱-闻香(gc-o)技术进行香气分析时会相互影响，并且对其他香气成分的鉴定造成干扰。此外，利用气相色谱-质谱联用法(gc-ms)进行物质定量时，势必会造成杂离子偏多，定量结果偏差的问题。

　　因此，在白酒的香气成分分析研究中需要引入分馏技术。一般方法是在液液萃取技术的基础上通过调节溶液的ph将白酒的挥发性香气成分分为酸性、碱性、水溶性和中性组分。如中国专利申请号为4.0、专利名称为“一种兼香型白酒中风味化合物的检测方法”，通过将白酒ph依次调节为1、11、中性后分别进行液液萃取，获得酸性、碱性、水溶性组分。该方法开创了兼香型白酒挥发性风味物质的一种检测方法，在直接萃取鉴定的基础上将白酒中挥发性香气成分分为不同的组分进行鉴定，从而可减少色谱峰叠加造成的物质干扰。但是，重复进行液液萃取操作一方面实验程序繁琐，耗时长，萃取剂消耗量大，另一方面由于萃取效率原因会造成物质的损失。而且，从结果来看，酯类物质与其它成分并未完全分开，在三个组分中均检测到酯类物质。

　　另外，在《酿酒》期刊文章“老白干香型白酒香气成分分析”(2008年)中，作者采用液液萃取的方式将白酒挥发性香气成分分为酸性组分、水溶性组分、中性/碱性组分后进行gc-o分析。虽然该方法三种组分中的成分基本被分开，但中性/碱性组分中有酯类、呋喃类、硫化物、吡嗪类、芳香类以及内酯等几大类成分，其中酯类物质在白酒中主要呈现水果香、花香等香气，并且酯类物质种类较多，在整个气相程序中都有酯类的流出，有些酯类因含量较高，其香气强度较大会存在香气延长的现象，这些因素都会造成对白酒gc-o分析的干扰，进而导致香气物质鉴定的遗漏或不准确。

　　也有报道采用正相色谱技术对中性组分的成分进行继续分离，即采用硅胶柱的色谱效应进行分馏。如在《酿酒科技》期刊文章“应用液液萃取结合正相色谱技术鉴定汾酒与郎酒挥发性成分(上)”与“应用液液萃取结合正相色谱技术鉴定汾酒与郎酒挥发性成分(下)”(2013)先通过液液萃取结合酸碱调节的方法将白酒挥发性成分分为酸性组分、碱性组分、水溶性组分，再通过在硅胶柱上用不同极性的溶剂洗脱将中性组分分为8个亚组分。该方法在11个组分中共鉴定出698种挥发性成分，但各类物质在不同组分中的流出并没有很清晰的规律。另外，在《食品与生物技术学报》期刊文章“药香型董酒的香气成分分析”中，作者通过液液萃取结合正相色谱技术将药香型白酒分为8个组分并进行gc-o分析，由结果可以看出该方法可将白酒中不同类别的挥发性成分大致分开，但液液萃取的方法存在着操作繁琐、耗时长、有机试剂消耗量大等问题。

　　由此可见，提供一种能够将挥发性酯类物质与其它风味成分有效分离的方法，对于白酒的风味分析和品质提升具有重要意义。

　　本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的目的在于提供分离白酒中挥发性酯类风味物质的固相萃取柱串联方法。

　　本发明提供了白酒中挥发性酯类物质的分离方法，将白酒上样于填料为乙基乙烯基苯二乙烯基苯的固相萃取柱，白酒的挥发性风味物质吸附于固相萃取柱中，然后将所述固相萃取柱与填料为硅胶的固相萃取柱串联，用戊烷：二氯甲烷体积比为(80:20)～(50:50)的混合溶剂洗脱，即将酯类物质洗脱。

　　进一步地，所述填料为乙基乙烯基苯二乙烯基苯的固相萃取柱为lichroluten。

　　本发明方法选用的乙基乙烯基苯二乙烯基苯填料柱具有吸附容量高，ph适用范围广，对风味物质不存在选择吸附性等优点。lichroluten即是一种填料为乙基乙烯基苯二乙烯基苯的固相萃取柱。

　　进一步地，白酒上样前依次用二氯甲烷、甲醇、3～10％vol乙醇水溶液对所述填料为乙基乙烯基苯二乙烯基苯的固相萃取柱进行活化。

　　优选地，二氯甲烷、甲醇、3～10％vol乙醇水溶液的用量均为1～4倍柱体积。

　　进一步地，上样完成后用水淋洗所述填料为乙基乙烯基苯二乙烯基苯的固相萃取柱，然后将柱子抽干。

　　进一步地，串联前依次用甲醇、二氯甲烷、戊烷对所述填料为硅胶的固相萃取柱进行活化。

　　进一步地，在所述填料为乙基乙烯基苯二乙烯基苯和填料为硅胶的固相萃取柱之间还串联了用于除水的装置。

　　进一步地，串联后采用梯度洗脱，洗脱剂依次为：戊烷；戊烷：二氯甲烷体积比98:2；戊烷：二氯甲烷体积比95:5；戊烷：二氯甲烷体积比90:10；戊烷：二氯甲烷体积比80:20；戊烷：二氯甲烷体积比50:50。

　　进一步地，所述的分离方法还包括如下步骤：进一步用二氯甲烷：甲醇体积比为90:10的混合溶剂洗脱，另外收集洗脱液，富集其它的挥发性风味物质。

　　本发明提供了白酒的gc-ms分析方法，按照上述的方法将主要的酯类物质与其它的挥发性风味物质分离，同时将所述填料为硅胶的固相萃取柱与gc-ms检测仪串联，获取检测结果。

　　柱箱升温程序为40℃保持5min，再以4℃/min升至230℃，保持15min。

　　进一步地，所述的gc-ms分析方法中质谱采用ei电离源，电子能量70ev，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，接口温度250℃。

　　本发明提供了白酒的gc-o分析方法，按照上述的方法将主要的酯类物质与其它的挥发性风味物质分离，同时将所述填料为硅胶的固相萃取柱与gc-o检测仪串联，进行嗅闻分析。

　　本发明方法能将白酒中的挥发性风味成分分离开来，特别是将种类较多、含量较高的酯类物质、醇类物质和酸类物质等物质分开，可大大减少白酒风味分析时酯类物质对gc-o、gc-ms分析的影响。分馏结果主要分为三部分：

　　1)酯类物质主要集中在戊烷：二氯甲烷(80:20)以前的组分，在戊烷：二氯甲烷(50:50)基本出完；少量的羟基酯类及二元酯类物质在极性最强的二氯甲烷：甲醇(90:10)组分流出；

　　2)内酯类、呋喃类、醇类、吡嗪类、酸类及大部分酚类物质均在二氯甲烷：甲醇(90:10)组分被洗脱出来；

　　3)缩醛类物质在戊烷：二氯甲烷(50:50)以及二氯甲烷：甲醇(90:10)组分被洗脱下来；芳香类物质中的芳香酯类主要集中在戊烷：二氯甲烷(50:50)(苯甲酸乙酯除外)，其他芳香类在二氯甲烷：甲醇(90:10)组分。

　　本发明方法开创了两种类型柱子进行吸附、串联的技术，一方面操作简单方便，另一方面规避了有机溶液分液、转移等过程中造成的风味物质损失等问题。该方法解决了以往白酒gc-o、gc-ms分析过程中酯类对闻香、定量操作的干扰问题，并且克服了操作繁琐等诸多不足，为白酒风味化学研究提供了新方法，对白酒的品质提升具有重要的意义。

　　图2为实施例1中模拟白酒酒样串联分馏戊烷：二氯甲烷(98:2)组分的总离子图；

　　图3为实施例1中模拟白酒酒样串联分馏戊烷：二氯甲烷(95:5)组分的总离子图；

　　图4为实施例1中模拟白酒酒样串联分馏戊烷：二氯甲烷(90:10)组分的总离子图；

　　图5为实施例1中模拟白酒酒样串联分馏戊烷：二氯甲烷(80:20)组分的总离子图；

　　图6为实施例1中模拟白酒酒样串联分馏戊烷：二氯甲烷(50:50)组分的总离子图；

　　图7为实施例1中模拟白酒酒样串联分馏二氯甲烷：甲醇(90:10)组分的总离子图。

　　下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

　　本发明首先采用模拟酒样，模拟酒样的配制方案如表1所示，将白酒中组分按表1中的浓度配置在52％vol酒精水溶液中。其中，表1涉及到的标准品及无水乙醇均购买自美国sigma-aldrich或日本tci公司。

　　取1-5ml白酒模拟样品于样品瓶中，用超纯水将其稀释至3-10％vol，混合摇匀。

　　依次用1-4倍柱体积的二氯甲烷、甲醇、3-10％vol酒精水溶液对lichroluten(0.1-0.5g)进行活化。稀释后的模拟白酒样品直接上样，控制流速1-5ml/min，上样完成后用1-4倍柱体积的超纯水淋洗除去杂质，后将柱子抽干。

　　依次用1-4倍柱体积的甲醇、二氯甲烷、戊烷对硅胶柱(0.5-3.0g)进行活化，活化完成后将lichroluten与硅胶柱进行串联，依次用戊烷、戊烷：二氯甲烷(98:2)、戊烷：二氯甲烷(95:5)、戊烷：二氯甲烷(90:10)、戊烷：二氯甲烷(80:20)、戊烷：二氯甲烷(50:50)、二氯甲烷：甲醇(90:10)进行洗脱，以上比例均为体积比，各组分洗脱体积为2-10ml，洗脱速度控制在1-5ml/min。所有组分氮吹浓缩到1ml，加入内标4-辛醇(终浓度5-20ppm)。

　　质谱条件：ei电离源，电子能量70ev，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，接口温度250℃，采用全扫描模式，扫描范围(m/z)35.00-350.00。

　　在上述条件下对不同组分的中的挥发性物质进行鉴定：通过化合物与标准品的保留时间与nist14数据库提供的标准质谱图对照，利用匹配度、特征离子以及保留时间进行定性分析鉴定，鉴定结果如表2-表4所示。

　　注：数值代表该组分中物质的浓度占保留在lichroluten柱子上该物质的总浓度的百分比，下同。

　　由小体积模拟白酒酒样进行的串联分馏结果可以看出，主要的酯类物质都在戊烷：二氯甲烷(80:20)之前被洗脱，在戊烷：二氯甲烷(50:50)之前含量较高的酯类基本被完全洗脱，其它风味物质则大部分集中于二氯甲烷：甲醇(90:10)。虽然少量的羟基酯类及二元酯类物质在极性最强的二氯甲烷：甲醇(90:10)相，但其香气强度不高，不会对gc-o分析造成明显干扰。可见，如果采用本发明分离方法，用戊烷：二氯甲烷(80:20)的洗脱剂可以很好地将酯类物质与醇类物质、酸类物质等类型物质分离开，要达到更好的分离效果可以采用戊烷：二氯甲烷(50:50)的洗脱剂，从而为后续gc-o分析、物质的定量分析减少干扰。

　　由于在进行白酒的gc-o分析时，需要各种物质具有较高的浓度，即需要用大体积的白酒样品进行富集浓缩，因此为验证该分馏方法在gc-o分析中是否可行，还需提高样品体积进行验证。具体步骤如下：

　　(1)取10-20ml模拟样品于样品瓶中，用超纯水将其稀释至3-10％vol，混合摇匀。

　　依次用1-4倍柱体积的二氯甲烷、甲醇、3-10％vol酒精水溶液对lichroluten(0.5-5.0g)进行活化。稀释后的白酒样品直接上样，控制流速1-5ml/min，上样完成后用1-4倍柱体积的超纯水淋洗除去杂质，抽柱子10-20min。

　　依次用1-4倍柱体积的甲醇、二氯甲烷、戊烷对硅胶柱(3.0-10.0g)进行活化。本实施例中在两根柱子中加入一根填料为无水硫酸钠的小柱，目的是将lichroluten填料柱洗脱下来的成分中的水完全去除后再进入硅胶柱，以保证硅胶柱的分离性能。即将上述lichroluten填料柱、5-20g无水硫酸钠、硅胶柱依次串联，再依次用戊烷、戊烷：二氯甲烷(98:2)、戊烷：二氯甲烷(95:5)、戊烷：二氯甲烷(90:10)、戊烷：二氯甲烷(80:20)、戊烷：二氯甲烷(50:50)、二氯甲烷：甲醇(90:10)进行洗脱，以上比例均为体积比，各组分洗脱体积为20-50ml，洗脱速度控制在1-5ml/min。所有组分氮吹浓缩到1ml，加入内标4-辛醇(终浓度5-20ppm)，各组分上样之前加入5-10ml置换出上一组分样品。

　　质谱条件：ei电离源，电子能量70ev，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，接口温度250℃，采用全扫描模式，扫描范围(m/z)35.00-350.00。

　　在上述条件下对不同组分的中的挥发性物质进行鉴定：通过化合物与标准品的保留时间与nist14数据库提供的标准质谱图对照，利用匹配度、特征离子以及保留时间进行定性分析鉴定。戊烷、戊烷：二氯甲烷(98:2)、戊烷：二氯甲烷(95:5)、戊烷：二氯甲烷(90:10)、戊烷：二氯甲烷(80:20)五个组分在扩大体积时为分别洗脱，但由于这几个组分中只有酯类物质，为了数据的简洁性，在计算时几个组分的数据合在一起(混合组分1)，鉴定结果如表5-表7所示。

　　由大体积模拟酒样的串联分馏结果可以看出，大体积酒样的分馏规律与小体积的基本一致，说明本发明方法可应用于白酒gc-o分析的前处理。

　　选取浓香型、酱香型、清香型成品白酒样品，分别进行大体积的串联分馏实验。具体步骤如下：

　　(1)取10-20ml样品于样品瓶中，用超纯水将其稀释至3-10％vol，混合摇匀。

　　依次用1-4倍柱体积的二氯甲烷、甲醇、3-10％vol酒精水溶液对lichroluten(0.5-4.0g)进行活化。稀释后的白酒样品直接上样，控制流速1-5ml/min，上样完成后用1-4倍柱体积的超纯水淋洗除去杂质，抽柱子10-20min。

　　依次用1-4倍柱体积的甲醇、二氯甲烷、戊烷对硅胶柱(3.0-10.0g)进行活化。将上述lichroluten填料柱、5-20g无水硫酸钠、硅胶柱依次串联，再依次用戊烷、戊烷：二氯甲烷(98:2)、戊烷：二氯甲烷(95:5)、戊烷：二氯甲烷(90:10)、戊烷：二氯甲烷(80:20)、戊烷：二氯甲烷(50:50)、二氯甲烷：甲醇(90:10)进行洗脱，各组分洗脱体积为20-50ml，洗脱速度控制在1-5ml/min。所有组分氮吹浓缩到1ml，加入内标4-辛醇(终浓度5-20ppm)，各组分上样之前加入5-10ml置换出上一组分样品。

　　质谱条件：ei电离源，电子能量70ev，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，接口温度250℃，采用全扫描模式，扫描范围(m/z)35.00-350.00。

　　在上述条件下对不同组分的中的挥发性物质进行鉴定：通过化合物与标准品的保留时间与nist14数据库提供的标准质谱图对照，利用匹配度、特征离子以及保留时间进行定性分析鉴定。戊烷、戊烷：二氯甲烷(98:2)、戊烷：二氯甲烷(95:5)、戊烷：二氯甲烷(90:10)、戊烷：二氯甲烷(80:20)五个组分在扩大体积时为分别洗脱，但由于这几个组分中只有酯类物质，为了数据的简洁性，在计算时几个组分的数据合在一起(混合组分1)，鉴定结果如表8-表10表所示。

　　由本发明串联分馏技术在白酒中的应用结果可以看出，该技术在不同香型的成品白酒中的香气物质分馏规律与前期模拟酒样的分馏规律基本相同：除羟基酯外的酯类物质基本上在戊烷：二氯甲烷(80:20)以前的组分被洗脱出来，吡嗪类、醇类、呋喃类、酚类、酸类物质均在二氯甲烷：甲醇(90:10)组分被洗脱出来，芳香类物质中芳香酯类大多数在戊烷：二氯甲烷(50:50)以前的组分被洗脱出来，与酯类物质类似。缩醛与醛酮类物质基本集中在戊烷：二氯甲烷(50:50)与二氯甲烷：甲醇(90:10)两个组分中。

　　综上所述，本发明方法可从总体挥发性香气成分中将酯类物质单独分离出来，很好的解决了酯类物质、酸类物质、醇类物质相互共洗脱在气相色谱分析过程中对其他类型风味物质的干扰，并且操作简单，稳定性高，是白酒挥发性风味成分提取分离的优质方法，为白酒风味化学研究提供了新技术，对白酒的品质提升具有重要的意义。

　　取1-5ml白酒样品于样品瓶中，用超纯水将其稀释至3-10％vol，混合摇匀。

　　依次用1-4倍柱体积的二氯甲烷、甲醇、3-10％vol酒精水溶液对lichroluten(0.1-0.5g)进行活化。稀释后的白酒样品直接上样，控制流速1-5ml/min，上样完成后用1-4倍柱体积的超纯水淋洗除去杂质，后将柱子抽干。

　　依次用戊烷、戊烷：二氯甲烷(98:2)、戊烷：二氯甲烷(95:5)、戊烷：二氯甲烷(90:10)、戊烷：二氯甲烷(50:50)、二氯甲烷：甲醇(90:10)进行洗脱，以上比例均为体积比，各组分洗脱体积为2-10ml，洗脱速度控制在1-5ml/min。所有组分氮吹浓缩到1ml，加入内标4-辛醇(终浓度5-20ppm)。

　　质谱条件：ei电离源，电子能量70ev，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，接口温度250℃，采用全扫描模式，扫描范围(m/z)35.00-350.00。

　　在上述条件下对不同组分的中的挥发性物质进行鉴定：通过化合物与标准品的保留时间与nist14数据库提供的标准质谱图对照，利用匹配度、特征离子以及保留时间进行定性分析鉴定，鉴定结果如下表所示。

　　由白酒酒样在lichroluten柱子上的直接分馏结果可以看出，酯类物质在戊烷：二氯甲烷(90:10)相之前被洗脱出来，并且分布较散，醇类物质在每个组分都有洗脱，呋喃类物质在除了戊烷相以外的组分中均有洗脱出来。可见，上述方法对于白酒中挥发性物质的分离效果不如本发明方法。

　　需要说明的是，本说明书中描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例以及不同实施例的特征进行结合和组合。