用天平称量40g青霉素工业盐，放入烧杯中。在磁力搅拌器下，加入100ml的蒸馏水溶解（溶液呈透明，无颗粒）。向溶液中滴加10%的硫酸，注意加入速度一定要缓慢，以白色絮状物质不产生为宜。边加入硫酸，边检测测pH值，当pH值=2.0±0.2时停止加入硫酸。。加入40ml的丁酯(分两次加入，第一次用量3/5，第二次用量2/5)，边加入边调大搅拌，萃取在10min内完成。

　　（1）Na2S2O3的标定取K2Cr2O30.15g于碘量瓶中，加入50mL水，使之溶解，再加入KI 2g，溶解后加入稀硫酸40mL，摇匀，密闭，在暗处放置10min,取出后再加水250mL稀释，用Na2S2O3滴定临近终点时，加淀粉指示剂3mL，继续滴定至蓝色消失，记录Na2S2O3消耗的体积。

　　青霉素在酸性条件下，以酸的形式存在，很容易溶于醇、酮、醚和酯类等有机溶剂，在水中的溶解度很小，且迅速丧失其抗菌能力。在中性条件下以盐的形式存在，易溶于水、甲醇等，而几乎不溶于、氯仿或醋酸戊酯，微溶于乙醇、丁醇、酮类或醋酸乙酯中，但如果此类溶剂中含有少量水分，其在该溶剂中的溶解度就大大增加。因此，利用萃取法提取青霉素，调节溶液的PH值，使其在水相和有机相中的溶解度不同，实现萃取和反萃取。

　　在磁力搅拌器下，向脱水后的丁酯萃取相中，缓慢滴加30%的碳酸钾溶液，边加入边检测测pH值，当pH值=7.0±0.2时停止加入。

　　将上述混合液移入分液漏斗中，静置10min，待分层后，用烧杯收集下层水相（重相），上层丁酯相（轻相）倒入回收瓶中（避免倒入下水道）。

　　将上述溶液移入分液漏斗中，静置10min。待分层后，用两个烧杯分别收集上层丁酯相（轻相）和下层水相（重相）。

　　重相计量体积，并做好记录。加入40ml的丁酯，对重相进行第二次萃取（操作方法同第一次萃取）。记录重相体积。将重相PH值调至中性，倒入下水道。

　　在磁力搅拌器下，向丁酯萃取相中加入1/5体积的饱和食盐水，分两次（等量）洗涤萃取液10min，将上述溶液移入分液漏斗中，静置10min，待分层后，将上层萃取相收集在干净的烧杯中，下层饱和食盐水废弃，再重复1-2次，得到脱水后的丁酯萃取相。

　　（2）取5 mL定容好的青霉素溶液于碘量瓶中，加NaOH溶液1mL，放置20min，再加入1 mLHCl溶液与5 mLHAc-NaAc缓冲液，精密加入碘滴定液5mL，摇匀，密闭，在20-25℃暗处放置20min,用Na2S2O3滴定液滴定，临近终点时加入淀粉指示剂3 mL，继续滴定至蓝色消失，记录Na2S2O3消耗的体积（V对照）

　　PH=2.0～2.2时青霉素以游离酸状态由水相转移至丁酯相,而在PH=6.8～7.2时以成盐状态由酯相进入缓冲液（水相）。

　　（3）另取5 mL定容好的青霉素钠溶液于碘量瓶中，加入5 mLHAc-NaAc缓冲液，再精密加入碘滴定液5mL，用Na2S2O3滴定液滴定至蓝色消失，记录Na2S2O3消耗的体积（V空白）

　　（4）取萃余相5mL于碘量瓶中，按步骤（1）的方法进行测定，记录Na2S2O3消耗的体积（V样品）

　　（1）根据Na2S2O3-I22:1,分别计算操作步骤3 萃取率的计算中各步滴定的碘的量I①, I②, I③

　　（4）计算：萃取率=（萃取前青霉素含量－萃取后青霉素含量）/萃取前青霉素含量。